Состав (Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам):
Пептический перевар животной ткани 18,00 грамм/литр
Ферментативный гидролизат казеина 4,00 грамм/литр
Говяжий экстракт 6,00 грамм/литр
Хромогенная смесь 12,44 грамм/литр
Агар-агар 15,00 грамм/литр
Конечное значение рН (при 25°С) 7,2 ± 0.2
Приготовление:
Размешать 32,45 г порошка M1353 или 55,44 г порошка M1418 в 1000 мл дистиллированной воды. Осторожно прокипятить для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. Остудить до 50°С. Перемешать и разлить в стерильные чашки Петри.
Принцип и оценка результата:
Хромогенный агар для обнаружения и подсчета уропатогенных бактерий разработан на основе результатов исследований, опубликованных Pezzlo (1), Wilkie и соавт. (2), Friedman и соавт. (3), Murray и соавт. (4), Soriano и Ponte (5) и Merlino и соавт. (6). Эту среду рекомендуют для обнаружения уропатогенных бактерий и как питательную среду общего назначения, поскольку она облегчает и ускоряет идентификацию некоторых грамотрицательных и грамположительных бактерий по различной окраске колоний. Характер окраски определяется взаимодействием родо- и видоспецифичных ферментов бактерий (Enterococcus spp, Esherichia coli и других колиформных бактерий) с двумя хромогенными субстратами.
Содержащиеся в пептоне аминокислоты (триптофан и фенилаланин) помогают выявить триптофандезаминазную активность, характерную для Proteus spp, Morganella spp и Prividencia spp. Один из хромогенных субстратов расщепляется β-глюкозидазой энтерококков, что приводит к образованию ими синих колоний. Кишечные палочки образуют розовые или красные колонии вследствие активности другого фермента- β-D-галактозидазы. Колиформные бактерии ввиду гидролиза обоих хромогенных субстратов обычно образуют фиолетовые колонии. У некоторых штаммов Enterobacter cloacae фермент β-глюкозидаза отсутствует, поэтому они образуют такие же по цвету колонии, как у кишечных палочек. Для подтверждения принадлежности к виду E. coli можно использовать тест на индол (реактив DMACA, R035). Тест на индол лучше проводить на фильтровальной бумаге; он позволяет различить колонии E. coli и Enterobacter cloacae, а также Proteus mirabilis и других видов.
Ферментативный гидролизат казеина, пептический перевар животной ткани и говяжий экстракт удовлетворяют потребности бактерий в источниках азота, углерода и необходимых факторах роста.
Контроль качества:
Внешний вид порошка:
Гомогенный сыпучий порошок светло-желтого цвета.
Плотность готовой среды:
По плотности соответствует 1,5 % агаровому гелю.
Цвет и прозрачность готовой среды:
В чашках Петри формируется прозрачный или слегка опалесцирующий гель светло-янтарного цвета.
Кислотность:
При 25°С 3,24 %-й (вес/об) водный раствор М1353 имеет рН 6,8 ± 0.2, а 5,54 %-й (вес/об) водный раствор М1418 - 7,2 ± 0.2.